細(xì)胞培養(yǎng)基中雙抗?jié)舛仁嵌嗌?？該怎樣添加?/h1>

更新時(shí)間：2023-05-26  |  點(diǎn)擊率：912

細(xì)胞培養(yǎng)基中，將常會(huì)添加“雙抗"用于預(yù)防微生物污染。細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中用到的雙抗，一般是指青霉素和鏈霉素的組合。主要作用于細(xì)菌的細(xì)胞壁與核糖體。由于真核細(xì)胞沒(méi)有細(xì)胞壁以及核糖體與原核細(xì)胞不同，抗生素一般對(duì)真核細(xì)胞培養(yǎng)無(wú)害。

 

在細(xì)胞培養(yǎng)液中，一般推薦的青霉素的工作濃度為100U/ml，鏈霉素的工作濃度為0.1mg/ml。在使用時(shí)，按需配制或稀釋即可。另外，需要注意的是，抗生素對(duì)熱環(huán)境比較敏感，因此應(yīng)在-20℃環(huán)境下長(zhǎng)期保存，在2-8℃可短期保存，配制成培養(yǎng)液后應(yīng)在一周內(nèi)用完。

 

雖然在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，雙抗被廣泛使用，并且認(rèn)為對(duì)真核細(xì)胞無(wú)害，但已有研究表明，β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素及氨基糖甙類(lèi)抗生素，對(duì)真核細(xì)胞培養(yǎng)有抑制增殖作用。并且這種抑制增殖作用在原代細(xì)胞和干細(xì)胞等難養(yǎng)細(xì)胞上尤其明顯。2017年，加州大學(xué)Nadav Ahituv博士在Scientific Reports上發(fā)表文章，呼吁在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中減少抗生素的使用[4]。他們發(fā)現(xiàn)抗生素（“雙抗"：青霉素和鏈霉素）的使用影響人體肝細(xì)胞中基因表達(dá)與基因調(diào)控。其中有209個(gè)基因的表達(dá)發(fā)生了改變，特別是與藥物和應(yīng)激反應(yīng)相關(guān)的基因。超過(guò)9,500個(gè)基因調(diào)控元件發(fā)生了變化，并且很多調(diào)節(jié)元件位于參與細(xì)胞分化，核酸酶活性和tRNA修飾的基因附近。雖然這些基因的數(shù)量在龐大的細(xì)胞基因庫(kù)中不值一提，但這絕對(duì)不是一個(gè)應(yīng)該被忽略的事件。

 

因此，在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，應(yīng)減少“雙抗"的使用，可通過(guò)其他方式，預(yù)防細(xì)胞發(fā)生污染。定期用支原體祛除試劑清潔、擦拭實(shí)驗(yàn)臺(tái)；合理的消毒；規(guī)范的實(shí)驗(yàn)操作等，都有利于預(yù)防細(xì)胞污染。

德國(guó)MB支原體預(yù)防試劑，Mycoplasma-off，不僅能祛除支原體，對(duì)其他微生物也有效。

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