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細(xì)胞培養(yǎng)注意事項(xiàng)~培養(yǎng)基

更新時(shí)間:2022-03-01  |  點(diǎn)擊率:1287

培養(yǎng)基

1、培養(yǎng)基的選擇依細(xì)胞種類(lèi)而定。如果是從別的實(shí)驗(yàn)室借來(lái)的細(xì)胞,最初階段一定要保持細(xì)胞原有的培養(yǎng)條件;特殊種類(lèi)的細(xì)胞,比如內(nèi)皮細(xì)胞,可以借鑒網(wǎng)上培養(yǎng)成功的條件,添加一些特定成分。

2、液體培養(yǎng)基的保存條件應(yīng)是冰箱4度冷藏。小六兒見(jiàn)過(guò)有的大實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞量多,一次性購(gòu)買(mǎi)的培養(yǎng)基瓶數(shù)也多,有些人可能覺(jué)得-20冰箱保存時(shí)間會(huì)更久一些。但是經(jīng)過(guò)冷凍后的培養(yǎng)基再溶化時(shí),你會(huì)發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基的顏色發(fā)生變化,顏色變深,這就是培養(yǎng)基的PH值升高了。

3、培養(yǎng)基中都含有大量的谷氨酰胺,用來(lái)合成細(xì)胞生長(zhǎng)所需要的核酸和蛋白質(zhì)。但是谷氨酰胺在溶液中不穩(wěn)定,保存4周后的培養(yǎng)基需要重新加入谷氨酰胺。所以盡量不要大批量購(gòu)買(mǎi)培養(yǎng),也不要一次配太多的培養(yǎng)基。

4、細(xì)胞適合的培養(yǎng)基PH值是7.2-7.4,偏高或偏低都不好,但相對(duì)于堿性條件而言,細(xì)胞更耐酸。原代細(xì)胞對(duì)PH值的變化很敏感,而永生性細(xì)胞相對(duì)來(lái)說(shuō)忍受力更強(qiáng)一些。

5、造成皿或瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基PH值變化的原因有很多:細(xì)胞增殖速度的快慢、孵箱內(nèi)二氧化碳的濃度不準(zhǔn)確、培養(yǎng)瓶的蓋子擰緊或者發(fā)生了污染。如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)慢,刨除細(xì)胞本身狀態(tài)的原因,可以在培養(yǎng)液中添加丙酮酸鈉(丙酮酸鈉是糖酵解的中間產(chǎn)物,為細(xì)胞生長(zhǎng)提供ATP,提供合成大代謝所需要的碳源,使用濃度通常是0.1mM)。


6、細(xì)胞發(fā)生污染,培養(yǎng)基的PH值也會(huì)發(fā)生變化。如果新配置的培養(yǎng)基出現(xiàn)沉淀,很可能是廣口瓶沒(méi)有清洗干凈,瓶中殘留的磷酸鹽造成培養(yǎng)基成分的析出。

7、孵箱內(nèi)濕度對(duì)維持培養(yǎng)基的滲透壓也有很重要的作用。大部分細(xì)胞適應(yīng)的滲透壓在260-320mOsm/kg。濕度不夠時(shí),培養(yǎng)基蒸發(fā),液體的滲透壓就會(huì)升高。

8、培養(yǎng)基在使用前需提前從冰箱拿出,使其恢復(fù)至室溫或者37度水浴。

9、操作過(guò)程中,如果槍頭中已經(jīng)有培養(yǎng)基或其他液體成分,不要再經(jīng)過(guò)酒精燈被高溫加熱。高溫不僅會(huì)使有效成分失效,更有可能產(chǎn)生有毒物質(zhì)。

10、我們購(gòu)買(mǎi)的培養(yǎng)基瓶上都會(huì)標(biāo)注避光保存,這是因?yàn)榕囵B(yǎng)基中的某些成分遇光會(huì)產(chǎn)生過(guò)氧化氫,具有細(xì)胞毒性。我們?cè)诔瑑襞_(tái)中處理細(xì)胞時(shí),因?yàn)闀r(shí)間較短,不會(huì)產(chǎn)生太大問(wèn)題。但是如果長(zhǎng)時(shí)間放置在室外或燈光下照射,或者有的冷藏冰柜的門(mén)是玻璃的,就會(huì)造成培養(yǎng)基質(zhì)量的下降。

科研實(shí)驗(yàn)中,細(xì)胞的體外培養(yǎng)一直是一個(gè)重要環(huán)節(jié)。細(xì)胞要養(yǎng)好,就要用好血清,如Ausbian®特級(jí)胎牛血清,它適合各種細(xì)胞培養(yǎng),尤其適合難養(yǎng)細(xì)胞,如:干細(xì)胞、肝細(xì)胞,神經(jīng)細(xì)胞,原代培養(yǎng)、細(xì)胞融合、轉(zhuǎn)染細(xì)胞等。

Ausbian®特級(jí)胎牛血清所有血清出廠前,均經(jīng)過(guò)嚴(yán)格質(zhì)控,每個(gè)批次附有詳細(xì)完整的《檢測(cè)報(bào)告》,包括:品名,貨號(hào),批號(hào),血源地,生產(chǎn)日期,保質(zhì)期,pH值、滲透壓、血紅蛋白、總蛋白、球蛋白、IgG、內(nèi)毒素、無(wú)菌檢查(細(xì)菌、真菌、支原體)、病毒檢查(如BVD、牛腺病毒、細(xì)胞病變效應(yīng)等)、促細(xì)胞生長(zhǎng)能力、細(xì)胞毒性、BVD-1/2抗體檢查等。

實(shí)驗(yàn)人對(duì)于新批次血清,應(yīng)認(rèn)真審閱《檢測(cè)報(bào)告》,做好試用前篩選第一步。(如何看懂《檢測(cè)報(bào)告》,可登陸“締一生物"網(wǎng)站,留言技術(shù)部,得到免費(fèi)幫助。)


它在國(guó)內(nèi)市場(chǎng)經(jīng)歷十幾年,被眾多科研工業(yè)客戶反復(fù)選擇,也是細(xì)胞典藏等重大項(xiàng)目十幾年的供應(yīng)品牌


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